К таким веществам относится красящее вещество крови - гемоглобин, содержащийся в красных кровяных тельцах - эритроцитах. Гемоглобину и его производным свойственны спектры поглощения в виде полос, образующиеся, в частности, и в видимой зоне спектра излучения (рис. 38).
При исследовании следов на вещественных доказательствах в целях экономии объекта пользуются не спектральным, а микроспектральным анализом, производимым при помощи микроспектроскопа, который вставляют в тубус микроскопа (в отечественной промышленности микроспектроскоп носит название "насадка АУ-16" или "СПО-1").
Рис. 39. Кристаллы гемохро-могена
Для этого исследования достаточно очень небольшого количества объекта - либо частицы высохшей крови ничтожной величины, либо частицы предмета-носителя, пропитанной или помаранной кровью.
Приступая к исследованию, судебномедицинский эксперт, во-первых, не знает, кровью ли образованы следы, имеющиеся на вещественном доказательстве, во-вторых, если это действительно кровь, неизвестно, в каком состоянии находится гемоглобин. Поэтому объект обрабатывают реактивами, которые в случае кровяного происхождения пятна переводят гемоглобин в состояние, свойственное значительно измененной крови, - в гемохромоген.
Если гемохромоген получить не удается, что может объясняться далеко зашедшим разложением крови, обработку производят другими реактивами с целью получения гематопорфирина.
Гемохромоген образуется при действии на кровь раствора едкой щелочи и восстановителя, а гематопорфи-рин - при действии концентрированной серной кислоты.
Применение некоторых реактивов, например реактива Такаяма, вызывает выпадение в препарате кристаллов гемохромогена (рис. 39).
Для гемохромогена характерен спектр поглощения, состоящий из двух полос в желто-зеленой области видимой зоны электромагнитного спектра (л)=565 - 554 [Греческая буква "ламбда" применяется для обозначения длины волн света] и 536 - 523mм), для гематопорфирина - спектр поглощения тоже из двух полос в оранжево-желтой и желто-зеленой части спектра (Л = 608 - 594 и 572 - 548 mм); между ними отмечается затемнение, сливающееся с полосой в желто-зеленой области, которое считают третьей полосой поглощения кислого гематопорфирина (А, = 584 - 572mм).
Обнаружение обоих спектров поглощения или одного из них с полной достоверностью свидетельствует о происхождении исследуемого следа от крови.
Определение видовой принадлежности. Установить наличие крови на предмете, подлежащем экспертизе, весьма важно для следствия. Однако следы крови могут и не иметь отношения к преступлению.
Если экспертизе подвергают вещественные доказательства, изъятые в связи с убийством или нанесением человеку телесных повреждений, необходимо выяснить, является ли обнаруженная кровь человеческой.
При расследовании дел о браконьерстве, например незаконном отстреле лося, требуется определить, не от лося ли произошла кровь, выявленная на том или ином предмете, и т. д.
Таким образом, при производстве экспертизы обязательно определяют видовую принадлежность крови. С этой целью широко применяют один из иммунологических методов, а именно метод белковой преципитации. Реакцию преципитации у нас именуют реакцией Чисто-вича-Уленгута, за рубежом реакцией Уленгута.
Принцип метода преципитации заключается в том, что при взаимодействии раствора белка, в том числе и белка крови, со специально приготовленной для обнаружения данного белка сывороткой образуется осадок (преципитат).
Исходя из требований практики, выпускают сыворотки, преципитирующие (осаждающие) белок человека, рогатого скота, лося, лошади, свиньи, собаки, кошки и птицы, а также сыворотки, позволяющие дифференцировать белок крупного и мелкого рогатого скота.
Кроме того, могут быть приготовлены сыворотки, преципитирующие белки и других представителей животного мира, в том числе рыб.
Преципитирующие сыворотки изготовляют путем иммунизации (повторные инъекции) кроликов нормальной сывороткой крови. Для получения сыворотки, преципитирующей белок человека, кролику вводят сыворотку человеческой крови, для приготовления сыворотки, преципитирующей белок лошади, сыворотку крови лошади и т. д.
Чтобы выяснить видовую принадлежность крови, вырезают маленький кусочек материала вещественного доказательства со следом крови и кусочек из расположенного рядом участка материала без крови (контроль, позволяющий убедиться в том, что в материале отсутствует белок не кровяного происхождения). Эти кусочки размельчают ножницами, помещают в отдельные пробирки, куда приливают незначительное количество физиологического раствора хлорида натрия, и оставляют на определенный срок (от нескольких часов до нескольких суток, в зависимости от растворимости крови) в рефрижераторе при температуре от +4° до +8°. Полученные вытяжки отделяют от материала (отсасывают пастеровскими пипетками), центрифугируют или фильтруют, до полной прозрачности. При помощи пробы с азотной кислотой, проводимой в целях экономии объекта капиллярным способом, устанавливают, перешел ли в раствор белок из следа крови, и в положительном случае разводят эту вытяжку физиологическим раствором до содержания белка приблизительно 1:1000; вытяжку из контрольного участка предмета-носителя не разводят. К обеим вытяжкам, а также к физиологическому раствору, которым производили экстрагирование объектов, добавляют сыворотку, преципитирующую белок человека, к другим порциям тех же ингредиентов - сыворотку, преципитирующую, например, белок лошади, к третьим порциям - сыворотку, преципитирующую белок другого животного (свиньи, собаки и т. д.). Если осадок в виде диска белого цвета образуется только при взаимодействии вытяжки из следа крови и сыворотки, преципити-рующей белок человека, а в жидкостях, находящихся во всех остальных пробирках, осадки отсутствуют, эксперт делает вывод, что кровь в следе на вещественном доказательстве произошла от человека. Выпадение осадка лишь в пробирке с вытяжкой из следа крови, куда была добавлена сыворотка, преципитирующая белок лошади, свидетельствует о том, что кровь принадлежит лошади, и т. д.
Рис. 40. Реакция преципитации в геле (агаре):
а) вытяжка из пятна крови, 6) вытяжка из контрольного участка, в) сыворотка, преципи-тирующал белок человека
Перед применением преципитирую-щих сывороток проверяют титр (крепость) и специфичность (действие, в пределах определенного срока и разведений, только с белком человека или животного того или иного вида) каждой из них.
Реакцию преципитации осуществляют в специальных пробирках с коническим нижним концом; преципитирующую сыворотку опускают пастеровской пипеткой на дно пробирки с вытяжкой, т. е. подслаивают под последнюю.
Помимо описанной реакции преципитации в жидкой среде имеется ее модификация - реакция в гелеобразной среде. На стекло тонким слоем наносят растительное студневидное вещество - агар; по застывании в нем делают три лунки, куда помещают вытяжку из следа крови, вытяжку из контрольного участка материала вещественного доказательства и сыворотку, преципитирующую тот или иной вид белка. Если применена сыворотка, преци-питирующая белок человека, а след на вещественном доказательстве был образован человеческой кровью, между лунками с вытяжкой из следа и преципитирую-щей сывороткой через определенный срок появится осадок в виде полосы (иногда несколько полос) белого цвета (рис. 40). То же произойдет при взаимодействии вытяжки из следа крови свиньи и сыворотки, преципити-рующей белок свиньи, и т. д. Вместо вытяжек из следа крови и контрольного участка предмета-носителя в лунки можно помещать непосредственно соответствующие кусочки материала вещественного доказательства, добавляя к ним капли физиологического раствора.
Реакция преципитации в геле менее чувствительна, чем реакция в жидкой среде, но в некоторых случаях обладает преимуществами. Она может быть проведена с мутными объектами и дает перспективы успешного и более доступного дифференцирования крови филогенетически близких животных, например крупного и мелкого рогатого скота; лося и быка.
Для определения видовой принадлежности крови существуют и другие реакции, но они не получили распространения в отечественной судебномедицинской практике, требования которой, как правило, полностью удовлетворяются применением реакции преципитации (преципитирующие сыворотки, изготовляемые в нашей стране, обладают высокими качествами, а схема реакции преципитации хорошо разработана).
Установление групповой принадлежности. Выяснение происхождения крови на вещественном доказательстве от человека или животного имеет большее значение, чем просто констатация факта присутствия неизвестно от кого произошедшей крови. Однако в настоящее время судебномедицинская экспертиза располагает еще большими возможностями: имеются научные данные, позволяющие разрешить вопрос, может ли принадлежать кровь тому или иному человеку потерпевшему, подозреваемому или она произошла не от них. Разрешение его основано на данных об антигенной дифференцировке человеческого организма. Уже в начале XX столетия стало известно о существовании определенной закономерности во взаимодействии крови различных людей: сыворотка одних агглютинирует (соединяет в гроздевидные конгломераты) эритроциты других. Вначале были открыты четыре группы крови. Вещества, обусловливающие реакцию агглютинации, получили названия агтлютиногены (антигены) - в эритроцитах, агглютинины (антитела) -в сыворотке. Первые обозначают прописными латинскими буквами, вторые - малыми буквами греческого алфавита. Приняты международные обозначения групп: Осф, Ар, Ва, АВО. В нашей судебномедицинской практике буквенные обозначения до сих пор дополняют цифровыми (эту цифровую классификацию предложил Янский) --Оар(1), Ар(П), Ва(Ш), АВО (IV). Агглютинация происходит в том случае, когда во взаимодействие вступают одноименные агглютиногены и агглютинины: А и а, В и р. Символ "о" в группе АВ указывает на отсутствие в сыворотке крови этой группы агглютининов аир. Агглю-тиноген "О" обнаруживается специальными сыворотками анти-О(Н), изготовляемыми путем иммунизации коз дизентерийной спиртовой вакциной Григорьева-Шига, или экстрактами из семян некоторых растений, содержащими фитагглютинин (лектин) анти-Н. Выяснено, что реагенты, выявляющие агглютиноген 0, агглютинируют не только эритроциты группы 0(1), но и в подавляющем большинстве случаев эритроциты групп А (II) и В (III), а также нередко и эритроциты группы AB(IV). Таким образом, в группах А(П), В(III) и AB(IV) наряду с основными агглютиногенами - А и В может присутствовать еще агглютиноген, который обозначают прописной латинской буквой Н или именуют сопутствующим агглю-тиногеном 0.
